1） His标签蛋白不和介质结合

a可能原因：超声功率不合适（太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放）

解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。

b.样品或缓冲液不合适

解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。

c.His标签暴露不完全

解决方法：在缓冲液中加变性剂（4-8M尿素，4-6M盐酸胍），然后用IMAC介质纯化。

d.His标签丢失

解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时降低上样速度，确保足够的孵育时间。

2） His标签蛋白结合在介质上洗脱困难

a.可能原因：洗脱条件太温和

解决方法：增加洗脱咪唑浓度或降低pH。

b.可能原因：蛋白沉积在介质上

解决方法：减少上样量，优化层析条件。

c.可能原因：非特异性结合

解决方法：缓冲液加2% Triton X-100和NaCl。

3） 洗脱峰杂质多

可能原因：非特异性结合，清洗不彻底，降解等。

解决方法：纯化过程加蛋白抑制剂防止降解，上样完后要彻底清洗，加一定的NaCl和咪唑减少非特异性结合。

4） 使用几次，介质结合效率降低，柱效降低。

可能原因：介质上沉积大量杂质等