【答】常见问题问 题回 答一个孔中应接种多少个细胞？当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。能否用384孔板进行试验？可以。向各孔中加入培养基体积10%...
【答】1. siRNA与转染试剂比例不佳 由于siRNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般...
【答】可能原因：洗脱强度不够解决方案：1）增加洗脱体积数。2）一般使用中建议的10mM浓度对于大多数应用来说足够了，但是也存在例外。可以尝试使用50mM Tris-HCl，20-40mM 还原型谷胱甘肽，pH8.0作为洗脱缓冲液。3）洗脱缓冲液pH过低时，应调整pH到8-9.4）洗脱缓冲液的离子强度不宜太低，应控制在100-300mM氯化钠浓度。可能原因：非特异性吸附解决方案：洗脱缓冲液中加入1%的Tr...
【答】可能原因：上样流速太快，结合时间太短解决方案：GST亲和层析是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和结合，GST与谷胱甘肽的结合相对缓慢，比金属螯合亲和层析纯化his蛋白结合要缓慢很多。上样流速太快，会影响结合效率。GST亲和层析时流速适当减慢，保证足够的结合时间。可能原因：缓冲液不合适，柱子平衡不到位解决方案：GST...
【答】.含有his标签蛋白的细胞（菌体）破碎释放蛋白时的破碎功率不合适（太小蛋白未能完全释放，太大蛋白碳化），此时就要优化细胞破碎的方法和条件。2.his未表达或者his蛋白表达过程中his丢失，必要时增加蛋白序列中his的个数并确保正确表达，可通过WB的方式去验证是否有表达。3.his标签在蛋白高级结构中暴露的不完全被包裹在蛋白结构里面，此时就要用6-8M尿素或盐酸胍使his标签暴露出来，同时要明确还...
【答】1） His标签蛋白不和介质结合a可能原因：超声功率不合适（太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放）解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。b.样品或缓冲液不合适解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。c.His标签暴露不完全解决方法：在缓冲液中加变性剂（4-8M尿素，4-6M盐酸胍），然后用IMAC介质纯化。d.His标签丢失解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时...
【答】1、细胞冻存密度为多少合适？ 对于大多数细胞类型，1~3×106/毫升即可；对于血液细胞，需要更高的密度，推荐5×106/毫升左右。2、每只冻存管储存多少体积细胞比较合适？ 每只冻存管中不应超过1毫升的细胞悬液，否则复温时间过长影响细胞复...
【答】1、使用LiveTissue系列产品，冻存、复苏的活肿瘤组织的生物活性怎样？ 使用LiveTissue冻存、复苏后的肿瘤组织保持70~80%的生物活性。2、冻存的活肿瘤组织是否可以替代传统的石蜡包埋组织、冰冻切片组织吗？ 可以。冻存的活肿瘤组织可以满足您的多种需求。由于冻存的活肿瘤组织在复苏后可...
【答】关于细胞标记和荧光素酶的特性 1. 荧光素酶的发光是否需要激发光？底物荧光素(Luciferin)是如何进入小鼠体内的？ 需要多少？荧光素酶的发光是生物发光，不需要激发光，但需要底物荧光素(D-Luciferin)。荧光素酶有554个氨基酸，约50KD。荧光素酶的底物荧光素，约280道尔顿。荧光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。荧光素是腹腔注射...
