可能原因：上样流速太快，结合时间太短

解决方案：GST亲和层析是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和结合，GST与谷胱甘肽的结合相对缓慢，比金属螯合亲和层析纯化his蛋白结合要缓慢很多。上样流速太快，会影响结合效率。GST亲和层析时流速适当减慢，保证足够的结合时间。

可能原因：缓冲液不合适，柱子平衡不到位

解决方案：GST亲和层析时缓冲液的pH应控制在6.5到8.0的之间，并保证足够的平衡体积数，让填料处于可以使用的状态，一般平衡10个柱床体积。

可能原因：样品中GST融合蛋白浓度太低

解决方案：因GST层析时，GST融合蛋白丰度太低时影响结合效率。对于低丰度的样品应先浓缩，在层析纯化。或者选则高载量GST-4FF填料

可能原因：GST蛋白发生变性或聚集

解决方案：

1）胞内表达的蛋白在细胞破碎时应选则合适的破碎方式，避免蛋白碳化或者变性。

2）发生聚集可以尝试添加1-10mM的DTT，促进蛋白的溶解。

3）GST蛋白和核酸结合或者蛋白之间结合，可以适当的添加氯化钠（100-300mM)