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GST蛋白洗脱困难

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更新时间:2019年12月13日14:58:55 打印此页 关闭
摘要: 可能原因:洗脱强度不够解决方案:1)增加洗脱体积数。2)一般使用中建议的10mM浓度对于大多数应用来说足够了,但是也存在例外。可以尝试使用50mM Tris-HCl,20-40mM 还原型谷胱甘肽,pH8.0作为洗脱缓冲液。3)洗脱缓冲液pH过低时,应调整pH到8-9.4)洗脱缓冲液的离子强度不宜太低,应控制在100-300mM氯化钠浓度。可能原因:非特异性...

可能原因:洗脱强度不够

解决方案:

1)增加洗脱体积数。

2)一般使用中建议的10mM浓度对于大多数应用来说足够了,但是也存在例外。可以尝试使用50mM Tris-HCl,20-40mM 还原型谷胱甘肽,pH8.0作为洗脱缓冲液。

3)洗脱缓冲液pH过低时,应调整pH到8-9.

4)洗脱缓冲液的离子强度不宜太低,应控制在100-300mM氯化钠浓度。


可能原因:非特异性吸附

解决方案:洗脱缓冲液中加入1%的TritonX-100或2%的可以显著提高某些GST标签蛋白的洗脱,降低非特异性吸附和蛋白之间的吸附。


可能原因:洗脱缓冲液中的谷胱甘肽被氧化了

解决方案:洗脱缓冲液需现配现用,GTH务必使用时在加入缓冲液中,也可尝试加入1-5mM的DTT。